Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований. Виктор Сбойчаков
В качестве бактерий-реципиентов чаще всего используют кишечную палочку (рис. 22).
Рис. 22. Схема получения трансгенных клеток E. coli – продуцентов интерферона человека (по: Шапиро Я. С., 2003):
мРНК – интерфероновая мРНК из клеток человека; кДНК1 – комплементарная однонитевая ДНК; кДНК2 – комплементарная двунитевая ДНК; рВR322 – плазмидный вектор; 1 – обратная транскриптаза; 2 – полимераза; 3 – лигаза; 4 – плазмида с геном интерферона; 5 – трансформация; 6 – клетка кишечной палочки с реконструированной плазмидой
Генная инженерия впервые дала возможность человеку управлять наследственностью. Так возникла биотехнология — промышленный способ производства на основе управляемого метаболизма живых организмов. В настоящее время происходит бурное развитие биотехнологии, основным объектом которой являются микроорганизмы. Именно микроорганизмы (бактерии, грибы) благодаря особенностям их метаболизма наиболее продуктивны и экономичны в биосинтезе веществ. Микроорганизмы поставляют также материал для генной инженерии (ревертазу, эндонуклеазы, векторы для генов). Из бактерий получают в большом количестве дешевые биологически активные вещества (гормоны, ферменты), которые ранее были дефицитными и очень дорогими. В нашей стране производятся генно-инженерный интерферон (реоферон), инсулин, интерлейкин-2, вакцина против гепатита В.
Генная инженерия и биотехнология открывают перед человечеством огромные перспективы. Однако даже обычные эксперименты в этой области могут быть опасными, так как при переносе генов могут возникнуть организмы с непредсказуемыми свойствами, поэтому работы по генной инженерии производятся в соответствии со строгими международными правилами.
Глава 6
МЕТОДЫ ОБНАРУЖЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ
6.1. Изучение микроорганизмов в окрашенном и живом состояниях
В связи с малыми размерами большинства патогенных микроорганизмов (не более 30 мкм) изучение их морфологии возможно только с помощью специальных оптических приборов, получивших название микроскопов (от греч. «микрос» – малый и «скойпен» – рассматривать, наблюдать).
Современные микроскопы позволяют получать раздельное увеличенное изображение микроорганизмов и других объектов и структур, не доступных невооруженному человеческому глазу.
В настоящее время в практике микробиологических исследований используется несколько типов микроскопов (биологический, люминесцентный, исследовательский, электронный) и специальных методов микроскопии (темнопольный, фазовоконтрастный).
Окрашенные тела микроорганизмов резко отличаются от общего фона препарата, что позволяет установить морфологические особенности микроорганизмов (форму, размеры, наличие спор, жгутиков, капсул) и степень чистоты выделяемой культуры.
Приготовление окрашенного препарата включает в себя несколько последовательных операций: